芹菜素(apigenin)是一种广泛分布于多种食用 植物及中草药中的黄酮类化合物。药理研究表 明

，芹菜素apigenin具有抗肿瘤、抗炎、抗动脉粥样硬化、抗血 栓形成及抗焦虑等作用。目前，对芹菜

素apigenin的作用 机制及体内药动学的研究日益受到重视。有文献报 道，动物口服主要成分是木犀

草素和芹菜素apigenin的菊花 提取物后，HPIC法检测不到血浆中的芹菜素apigenin。 有研究建立了

SPE一柱切换HPLC法分析人尿液中的芹菜素apigenin浓度，但实验条件要求较高。本研究的 目的是建

立HPI C法测定静脉给药后大鼠血浆和 胆汁中的芹菜素apigenin浓度，用于芹菜素apigenin的药动学

研究。
 

l 材 料

 1，1 仪器和试剂 1100型HPLC仪(美国Agilent 公司)。芹菜素原料药(纯度为98％长沙上禾生物科技

有限公司） ；菊花提取物芹菜素apigenin对照品；戊巴比妥钠(上海交通大学医学院附属新华医院动

物房提供)；甲醇(色谱纯)、磷酸和乙酸乙 酯(HPI C级，美国Tedia公司)；异丙醇(分析纯，常 熟市

杨园化工有限公司)；水为本院自制双蒸水。 1．2 动物SD雄性大鼠，体重220～270 gE上海斯 莱克实

验动物责任有限公司，动物许可证号：SCXK (沪)2003—0003~。

 2 方法和结果

 2．1 溶液的配制 (1)标准溶液的配制精密称取 芹菜素apigenin对照品2O mg，置于100 mL容量瓶中

，用甲 醇定容配制成浓度为200 t,g／mL的储备液。储备 液依次用甲醇稀释成8O、4O、20、10、5、4

、2．5、1、 0．4 g／mL系列浓度，一4℃冷藏备用。(2)外标样 品溶液的配制取空白大鼠血浆或胆汁

，分别加入标准溶液，配制浓度分别为0．04、0．1、0．4、1、4、 8~g／mI 的血浆外标样品溶液和0

．25、0．5、1、2、4、 8~g／mL的胆汁外标样品溶液，一4℃冷藏备用。 2．2 色谱条件Dikma Cl8色

谱柱(250 mm× 4．6 mm，3．5 fm)，流动相为甲醇：0．2 (V／V)磷 酸水溶液：66．5：33．5，检测

波长350 nm，流速为 0．8 mL／min，柱温35℃ ，进样量l0 I 。

 2．3 样品处理 取含药肝素抗凝血浆样品或胆汁 样品0．2 mI ，加5 mol／I 磷酸40 I ，振摇后加

提 取溶液(乙酸乙酯：异丙醇一19：1)0．6 mI ，充分 振摇，于1．3×10 r／min(离心半径5．8 cm)

离心 5 min。血浆样品取有机层0．45 mL，胆汁样品取有 机层0．5 mL，50。C水浴氮气吹干，残余物

用100 fI流动相溶解，取10肚L进样分析。

 2．4 方法学考察

 2。4．1 方法专属性 分别取6只大鼠的空白血浆 和空白胆汁，按2．3项下方法操作；将一定浓度的

芹 菜素标准溶液加入空白血浆和胆汁中，同法操作；大 鼠静脉注射20 mg／kg芹菜素apigenin对照品

后1 h取血浆 样品，同法操作；大鼠静脉注射芹菜素apigenin对照品 20 mg／kg后2～4 h取胆汁样品

，同法操作，得到各 自的色谱图见图1。结果表明，血浆中的内源性物 质不干扰芹菜素apigenin的测

定。

 2．4．2 标准曲线的制备 取各个浓度的外标样品 溶液，按2．3项下方法处理后进样测定。以芹菜素

apigenin 对照品的峰面积(A)对相应的浓度(c)进行线性回归。结果显示，血浆样品在0．04～8>g／mI

范围内 线性良好，其回归方程为：A一56．98 f+1．41，r一 0．999 8。胆汁样品在0．25～8~g／mI

范围内线性 良好，其回归方程为：A一81．97 c一3．3l，r一 0．999 8。

 2．4．3 精密度和准确度实验 取空白血浆和空白 胆汁，配制低、中、高浓度分别为0．04、l、8 g

／mL 的血浆质控样品和浓度为0．25、2、8#g／mL的胆汁 质控样品，连续测定5 d，将质控样品测得

浓度与配 制浓度相对照，求得准确度与精密度，见表1。

 2．4．4 稳定性实验 取空白血浆和空白胆汁配制 低、中、高浓度分别为0．04、1、8 g／mL的质控

样 品，分别考察样品冷冻一解融1次和2次；室温下放 置4 h以及冷冻l周的稳定性。每一浓度进行3样

本分析。结果表明，质控样品在各条件下均稳定 (RSD

 2．5 药动学研究

 2．5．1 血浆样本采集 SD大鼠5只，尾静脉注射 给予2O mg／kg芹菜素apigenin对照品，于给药即刻

及给药 后2．5、5、10、2O、30、60、90、120、180和240 min眼 眶取血，血液用适量肝素抗凝，3

000 r／min(离心半 径5．8 cm)离心10 min，血浆转移至1．5 mL聚丙烯 管，置于～2O℃冰箱保存，

待测。

 2．5．2 胆汁样品采集 SD大鼠5只，用3 戊巴 比妥钠麻醉，仰卧固定，腹部切口，胆道插管完成后

， 尾静脉注射20 mg／kg的芹菜素apigenin对照品，分别收集 给药后0～2、2～4、4～12、12～24 h

的胆汁。收集 样本所用的聚丙烯管中先加入5 mol／I 磷酸 200 L作为稳定剂。精密测定各时间段收

集的胆 汁体积，并置于一2O℃冰箱保存，待测。

 2．5．3 药动学参数 根据所测得的血药浓度做血 药浓度一时间曲线。结果显示，静脉给药后血药浓

度 迅速下降，表明药物消除迅速。利用DAS药动学参 数计算程序拟合处理，得到静注芹菜素apigenin

的血药浓度 时间曲线符合二室模型的特征，主要药动学参数见 表2。

 2．5．4 胆汁排泄实验 胆汁排泄的峰值为给药后 O～2 h内，24 h的总排泄量约为给药量的5．64％

。

 3 讨 论

 本实验建立了测定大鼠血浆和胆汁中芹菜素apigenin浓 度的方法，并对芹菜素apigenin的药动学进

行了初步研究。 大鼠尾静脉给予芹菜素apigenin后体内消除较快，胆汁排泄 迅速，由色谱图可明显

看到可能的代谢产物色谱峰， 推测为葡萄糖醛苷结合物。有研究报道，给狗灌服 主要成分是木犀草

素和芹菜素apigenin(含量分别为7．60 和5．19 )的菊花提取物后，血浆中不能检测到芹 菜素的含量

[3]。研究者分析可能由于经胃肠道给药 后，芹菜素apigenin转化为木犀草素，也有可能是芹菜素

apigenin快速 通过胆汁排泄。因此，本研究给大鼠注射芹菜素apigenin后， 考察了芹菜素apigenin

在大鼠血浆和胆汁中的浓度。有体外 实验研究表明，芹菜素apigenin的代谢产物有木犀草素、野黄

芩苷及异野黄芩苷 。作者所在的课题组正在对胆 汁样品中可能的芹菜素apigenin代谢产物进行结构

研究。

 芹菜素apigenin静脉注射后，血药浓度范围较大，为了使 分析样品的浓度在线性范围内，有必要对

高浓度的 样品进行稀释，所以本研究考察了血浆和胆汁样品 分别稀释至原浓度的1／10和1／2o后的

准确度和精 密度，结果表明稀释不影响高浓度样品的分析测定。

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